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在农杆菌介导的拟南芥转基因体系中,若目的基因被插入Ti质粒的T-DNA区以外,而T-DNA边界和Vir基因区均正常,则最可能的结果是___。
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为克隆某植物完整抗病基因(含启动子和内含子)以及其成熟转录本的编码区,团队分别将基因组DNA酶切片段克隆至噬菌体载体,将叶片mRNA反转录双链化后克隆至质粒载体。筛选完整基因时首选____文库,筛选不含内含子的表达序列时首选____文库。
某大肠杆菌突变株的色氨酸操纵子前导序列中,区域2发生缺失,区域1、3、4及衰减子多聚U序列均正常。请回答:当培养基中色氨酸浓度很低时,由于核糖体停滞在区域1,区域2无法与其配对,区域3将转而与区域____(填编号)配对形成终止茎环结构,导致衰减作用照常发生,这与野生型低色氨酸条件下衰减被解除的结果____(填“相同”或“相反”)。由此可知,该突变株在低色氨酸条件下色氨酸合成酶系的表达量比野生型____(填“高”或“低”)。
大肠杆菌色氨酸操纵子的衰减作用中,前导序列的区域2、3、4可通过互补配对形成不同的茎环结构。某突变株的区域2因缺失而无法与任何区域配对,区域3、4及其下游的多聚U序列完整。当培养基中色氨酸严重缺乏、核糖体在前导肽翻译处停滞时,区域3将与区域____(填编号)配对形成终止子结构,导致 RNA 聚合酶在结构基因转录开始之前____(填“终止”或“不终止”)转录,即该突变株的衰减调节____(填“仍然发生”或“完全失效”)。
在大肠杆菌翻译中,某mRNA起始密码子为AUG,编码一条120个氨基酸的多肽,终止密码子为UAG。已知起始阶段消耗1分子GTP;延伸阶段每掺入1个氨基酸消耗2分子GTP(进位和移位各1分子);终止阶段不消耗GTP,且由特异性释放因子识别终止密码子。则合成该多肽共消耗GTP分子数为____,识别UAG的释放因子为____。
某课题组拟克隆一段约 40 kb 的外源 DNA 片段。若选用 λ 噬菌体载体,其包装上限约为 50 kb 且要求外源片段长度达到一定范围才能被有效包装;若选用柯斯质粒(cosmid),其本身长约 5 kb,可容纳外源片段的大小主要受 λ 体外包装系统上限约束。综合比较,构建真核基因组文库时最常用于克隆 40 kb 左右大片段的载体类型是____,该类载体可容纳外源片段的典型大小约为 30~____ kb。
某研究者计划克隆人胰岛素基因,已知该基因仅在胰岛β细胞中表达。为高效筛选获得该基因,应从胰岛____细胞提取总mRNA,经逆转录酶合成双链cDNA并构建____文库;与基因组文库相比,该文库的克隆不含____序列,因而可直接用于在原核表达系统中合成胰岛素。
某实验室提取了某哺乳动物基因组DNA和该动物肝脏组织的总RNA,分别进行了Southern杂交和Northern杂交,均使用针对同一基因X外显子2的标记探针。已知该基因X在肝脏细胞中存在一个外显子2的旁系同源拷贝(序列同源性约80%),且该基因在肝脏高表达,在肾脏低表达。请回答:(1)Southern杂交用限制酶酶切基因组DNA后转膜杂交,可用于检测基因X的____(如酶切片段大小、基因拷贝数等基因组水平信息);(2)若要检测基因X在肝脏与肾脏组织中的表达量差异,应选择____杂交;(3)Northern杂交中,若探针在严谨性较低的条件下使用,可能因旁系同源拷贝mRNA的同源性而出现____条带,导致假阳性。
琼脂糖凝胶电泳中,双链DNA片段的迁移率主要受其分子大小与凝胶孔径的分子筛效应影响。现用同一浓度凝胶、同一电场条件对四个双链DNA片段A、B、C、D进行电泳,已知其碱基对数分别为500 bp、2000 bp、10000 bp、5000 bp。若四个片段的迁移率与碱基对数的负相关关系符合 v∝1/log(N) 的规律,则泳动最快(迁移率最大)的是片段____,泳动最慢的是片段____;若在正常电泳缓冲液(pH约8.0)中,DNA分子由于磷酸基团解离而带____电荷,因此由____极向____极迁移。
真核细胞中,某mRNA的5'非翻译区含铁反应元件(IRE)。铁充足时,铁调节蛋白(IRP)与铁结合而丧失与IRE的结合能力,mRNA高效翻译;缺铁时,IRP结合5'UTR中的IRE,物理阻断核糖体小亚基在5'UTR上的扫描,从而抑制翻译起始。据此回答:(1)缺铁时该mRNA的翻译水平____(填"升高"或"降低");(2)若将同样的IRE移至同一mRNA的3'非翻译区,缺铁时IRP的结合不再阻断扫描,而是招募核酸内切酶使mRNA加速降解,此时该mRNA的稳定性____(填"增加"或"减少"),翻译产物总量随之____(填"增加"或"减少");(3)上述两种效应表明,IRP/IRE系统可在____(填"翻译起始"或"转录起始")水平和mRNA稳定性两个层面对基因表达实施转录后调控。
某真核基因启动子区CpG岛的胞嘧啶被甲基化后,甲基化CpG结合蛋白招募组蛋白去乙酰化酶,使染色质处于____状态,转录因子难以结合,该基因转录沉默。若用DNA甲基转移酶抑制剂处理细胞,新合成的DNA链甲基化水平降低,经若干轮复制后该基因可能恢复表达,这种通过碱基修饰而非改变序列实现的调控属于____遗传。
某研究者比较两种细胞中一个基因的转录特征:甲细胞中,RNA聚合酶全须经σ因子识别-35区和-10区才能起始转录,转录与翻译可同时进行;乙细胞中,RNA聚合酶Ⅱ需在通用转录因子协助下于TATA盒处组装起始复合物,且初级转录产物需切除内含子后才有功能。据此填空:甲细胞属于____生物,乙细胞中转录与翻译在空间上被____隔开而不能同时进行,其mRNA成熟过程中切除内含子的加工方式称为____。
在大肠杆菌的核苷酸切除修复中,UvrA₂UvrB复合物识别DNA损伤后,UvrC在损伤位点5'侧第8个磷酸二酯键处切开,同时在3'侧第____个磷酸二酯键处切开,随后UvrD解链移去片段,两切口之间被切除的寡核苷酸片段共含____个核苷酸,留下的缺口由DNA聚合酶Ⅰ以未损伤链为模板填补。
某酿造厂拟用发酵工程新工艺生产一种胞外多糖。技术员按基本流程操作:先从土壤中分离筛选并诱变得到高产菌株,将其转入种子罐进行____以获得足量健壮菌种;随后配制培养基并在发酵罐内进行灭菌;冷却后接入种子液进行发酵,发酵中需不断通入无菌空气并控制温度与pH;发酵结束后通过离心沉淀并乙醇纯化获得产物,此环节称为____。整个流程中,菌种选育与种子罐操作两个环节的先后顺序应为:____(选填'先选育后扩大培养'或'先扩大培养后选育')。
某生物DNA复制中,仅依赖碱基互补配对原则时每个碱基的错配率为 1×10⁻⁴。DNA聚合酶的3'→5'外切校对活性可消除其中 98% 的错配,剩余错配中错配修复系统再消除 99%。则经过这两级校对后,每个碱基每次复制的最终错配率为____;对于一条长 5×10⁶ bp 的DNA链,每次复制平均产生____个错配碱基。