基因工程的基本操作程序 — 生物学填空题

科研人员欲将抗虫基因与质粒构建基因表达载体。已知目的基因两端分别含BamHⅠ和SalⅠ的识别序列，且这两种酶切割后产生的黏性末端不同。构建重组质粒时，应选用上述两种限制酶同时切割目的基因和质粒，目的是防止目的基因和质粒发生____，保证目的基因与质粒____连接。切割后需用DNA连接酶连接，该酶催化形成的是____键。将重组质粒导入受体细胞前，常用Ca²⁺处理____（填细胞类型），使其处于感受态。